恒遠解析:一抗孵育的起始條件及孵育的優(yōu)化

    實驗的所有步驟都必須經過優(yōu)化，以便觀察到特異染色，并盡可能減少非特異的背景染色。這包括開展預實驗，以確定每個一抗的適當孵育條件。抗原親和純化的多克隆抗體的稀釋度通常低于單克隆抗體，但這些值必須根據經驗確定。
注意：為了獲得可靠特異的信號，應采用交叉反應性極少的高質量抗體。
1、一抗孵育的起始條件：


2、一抗孵育的優(yōu)化：
   一抗?jié)舛取⑾♂屢骸⒎跤龝r間和溫度都影響了染色質量。這些變量需要針對每個抗體和樣品來優(yōu)化，以便實現特異染色和低背景。優(yōu)化通常是保持孵育時間和溫度不變，而改變抗體濃度，以確定何時獲得*信號和低背景噪音。例如，如果使用高親和力的抗體，那么相對較高的濃度可能需要較短的孵育時間。相反，較低的抗體濃度可能需要較長的孵育時間。人們通常采用較長的孵育時間，以確保抗體*滲透到體視學技術所用的組織切片。為了促進特異染色，較長時間的孵育通常在低溫下開展（即4°C vs 室溫）。
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